奥地利维也纳大学分析化学系的Katja Zappe等应用40例胶质瘤样本，探讨MGMT增强子甲基化是否与MGMT启动子甲基化、MGMT蛋白表达或总生存期相关。结果发表在2023年6月的《Cells》在线。

——摘自文章章节

2001年至2020年间开普勒大学医院40例胶质瘤标本中，38例IDH野生型GBM，1例IDH突变型GBM，1例胶质肉瘤。测定样本和商品化细胞系T98G中远端MGMT增强子中CpGs的甲基化状态。从VISTA增强子浏览器中选择一个基因内（hs696）和两个基因间（hs737，hs699）增强子以及Chen等最近发现的一个基因间增强子。对于MGMT启动子的DNA甲基化分析，研究使用文献中针对CpG72-83的引物。通过使用内部开发的方法来确定增强子的DNA甲基化状态。通过PCR扩增靶向区域并对PCR产物进行高分辨率熔解（HRM）分析和焦磷酸测序（PSQ）。HRM分析获取特定甲基化模式发生的信息，PSQ获取单个CpG的甲基化状态。

结果显示，位于MGMT内含子2的增强子（增强子4，hs696）中CpG的甲基化水平与MGMT启动子中CpG的甲基化水平呈显著负相关。与不表达MGMT的样本相比，增强子4在表达MGMT的样本中的CpG明显超甲基化。此外，增强子4的CpGs 01-03和CpGs 09-13的甲基化低水平有利于延长GBM患者的总生存期。研究发现，位于MGMT启动子上游560kb的增强子2中的CpG，对表达MGMT蛋白的MGMT启动子的GBM样本，甲基化状态与MGMT蛋白水平显著负相关。位于MGMT启动子上游和增强子2下游的增强子3（hs699）的4个CpG（CpG17、18、21和22）的甲基化水平在表达MGMT的GBM样本中显著高于非表达的GBM样本。增强子1（hs737）的甲基化状态，位于MGMT启动子上游一定距离，与MGMT启动子甲基化或MGMT表达无关，也与GBM患者的总生存期无关。

研究表明，增强子甲基化有助于调控MGMT，并且是GBM患者生存的潜在的预后因子。然而，四种增强子的DNA甲基化是否与SNP基因型相关，如MGMT rs16906252或临床病理特征，包括增殖标志物Ki-67、无进展生存期和GBM对TMZ的反应，仍有待进一步阐明。