日本秋田大学附属医院的Hayato Suzuki等发现IDHwt弥漫性胶质瘤除PI3K/MAPK通路基因突变外缺乏胶质母细胞瘤的分子特征；结果发表在2022年7月的《J Neurooncol》在线。
——摘自文章章节
【Ref: Suzuki H, et al. J Neurooncol. 2022 Jul 2. doi: 10.1007/s11060-022-04074-9. [Epub ahead of print]】
研究背景
弥漫性胶质瘤约占成人原发性恶性脑肿瘤的80%，分为异柠檬酸脱氢酶（IDH）野生型（IDHwt）或突变型（IDHmut）；前者目前认为是胶质母细胞瘤（GBM）。GBM典型的放射学特征是在MRI成像上呈快速增长的环状强化病变，倍增时间约为3周。临床上常见的IDHwt胶质瘤有时表现为长时间缓慢生长后再开始增大。近年来，IDHmut胶质瘤的特征、进展机制和治疗策略已逐渐明确，但对于术前病程较长而且惰性生长的IDHwt胶质瘤研究较少。日本秋田大学附属医院的Hayato Suzuki等发现IDHwt弥漫性胶质瘤除PI3K/MAPK通路基因突变外缺乏胶质母细胞瘤的分子特征；结果发表在2022年7月的《J Neurooncol》在线。
研究方法
胶质瘤“惰性生长”目前尚无确切定义。作者将其定义为术前发现一个小的强化病灶，稳定期超过1个月。该研究对象的纳入标准：①2011年1月至2020年12月间秋田医院收治的18岁以上成人弥漫性胶质瘤患者；②根据活检或手术标本诊断；③有术前和术后MRI成像数据，包括T2加权图像和T1加权钆增强图像；④病灶主要位于单侧大脑半球或小脑半球，增强病灶的体积小于T2高信号病灶体积的15%；⑤根据神经肿瘤学的治疗反应评价标准，T2高信号病灶和增强病灶的大小在术前1个月内保持稳定；⑥基因检测显示IDH1/2野生型。
研究者从医院数据库中提取患者数据，包括年龄、性别、病灶切除范围、放疗和化疗方案以及总体生存率。标本病理切片采用4μm厚度进行免疫组织化学染色。对于Ki67分析，使用扫描仪对标记最高的肿瘤区域进行成像，然后计算标记指数。使用Sanger测序评估IDH1/2状态。从福尔马林固定的包埋组织切片中提取DNA，并使用MiSeq仪器进行下一代测序（next generation sequencing，NGS）。重新提取基因组DNA（1μg）并用亚硫酸氢钠进行修饰，通过PyroMarker Q24进行焦磷酸测序评估O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（O6-methylguanine DNA methyltransferase，MGMT）启动子甲基化。参考队列数据来自癌症基因组图谱发布的GBM和IDHwt低级别胶质瘤合并队列。提取参考队列中所需数据，包括患者年龄、性别、组织学分级、基因突变状态、拷贝数变化和MGMT启动子状态、TERT启动子突变、EGFR扩增和7号染色体增加/10号染色体缺失，并比较该组病例和参考队列中与GBM相关的代表性调控通路基因突变情况，如PI3K/MAPK、TP53和RB通路。最后根据组织学诊断和分子诊断进行生存分析。
2011年1月至2020年12月秋田大学附属医院共收治180例18岁以上的弥漫性胶质瘤患者。根据纳入标准进行排除，最后9例纳入研究，在性别、年龄和肿瘤位置方面没有显著的临床特征。从第一次就诊到开始治疗的中位时间为3.7个月，手术时的中位肿瘤大小为57.0mm。全部和部分切除各2例，活检5例。8例患者接受局部放疗或全脑放疗，同时接受替莫唑胺治疗，然后接受替莫唑胺维持治疗。另一例患者组织学诊断为少突胶质细胞瘤，最初接受替莫唑胺维持治疗，然后在复发时接受放射治疗。大多数肿瘤具有星形细胞瘤的组织学特征，而在2例中观察到少突胶质瘤特征。免疫组化染色结果如下：IDH1 R132H：0%；ATRX：77.8%；TP53：33.3%；GFAP：77.9%和Olig2：88.9%。Ki67指数中位数为16.0%（范围3.4–53.9），与组织学分级显著相关（Spearman相关系数：r=0.77；p=0.016）。
研究结果
NGS和MGMT启动子甲基化评估结果显示，PI3K/MAPK通路基因突变的频率很高（8例，88.9%），其中PI3K3CA突变的频率最高（5例，55.6%）。TP53和RB通路基因突变分别在4例（44.4%）和1例（11.1%）中检测到。肿瘤突变负荷的中位数为8.7（范围0-17.4）。7例检测到拷贝数变异，但未发现染色体的增加和丢失。与PI3K/MAPK通路相关的拷贝数变异发生率高（7例，77.8%）；TP53和RB通路突变分别在2例（22.2%）和1例（11.1%）中检测到，均未检测到pTERT突变。该组病例中有2例EGFR扩增，拷贝数为5和6，略高于阈值，没有检测到7号染色体增加或10号染色体缺失。总之，根据目前的诊断标准，9例患者中只有2例表现出GBM的分子特征。MGMT启动子甲基化评估显示，5例甲基化状态为阳性。该组病例与参考队列相比，该组病例的WHO组织病理学分级显著低于参考队列。参考队列的426例中，412例具有GBM的一个或多个分子特征，显著高于该组病例。MGMT启动子甲基化状态没有显著差异。
生存分析结果显示，该组病例中位随访期为26.1个月（范围为13.6-55.6个月）。4例患者在随访期间死亡，中位生存时间为37.5个月，显著高于参考队列的13.9个月。Kaplan-Meier生存曲线显示，该组病例与参考队列之间总生存期存在显著差异。此外，与典型GBM（组织学诊断和分子诊断都是GBM）组和分子GBM（组织学提示低级别但分子诊断为GBM）组相比，该组病例的预后更好，而该组病例的临床进展与非GBM（组织学诊断和分子诊断都不是GBM）组相似。
研究结论
该研究调查IDHwt弥漫性胶质瘤的临床、组织学和分子特征，结果表明IDHwt弥漫性胶质瘤主要由低级别胶质瘤组成，大多数病例发现PI3K/MAPK通路基因变异，但未发现GBM的其它分子特征，可能尚未进展到GBM，这也解释为什么该组病例预后相比参考序列更好。
