日本医科大学神经外科的Eitaro Ishisaka等研究RNF213在QMMD基因诊断和临床分型中的作用。结果发表在2021年9月的《Neurosurgical Focus》在线。
——摘自文章章节
【Ref: Ishisaka E, et al. Neurosurg Focus. 2021 Sep;51(3):E2. doi: 10.3171/2021.5.FOCUS21182.】
烟雾病（moyamoya disease，MMD）是一类原因不明的脑血管进行性闭塞性疾病。主要影像学表现为颈内动脉末端狭窄或闭塞伴颅底异常血管网形成。伴有与烟雾病相关的潜在疾病称为准烟雾病（quasi-moyamoya disease，QMMD）。研究表明，指蛋白213（ring finger protein 213，RNF213）是烟雾病的易感基因。亚洲人群中经常发现RNF213的单一错义突变（c.14576G＞A，p.R4859K，rs112735431）。但RNF213基因突变与QMMD的关系尚不明确。日本医科大学神经外科的Eitaro Ishisaka等研究RNF213在QMMD基因诊断和临床分型中的作用。结果发表在2021年9月的《Neurosurgical Focus》在线。
研究回顾2014年8月至2018年8月在东京四家中心医院内治疗的MMD或QMMD患者的临床资料，包括性别、诊断年龄、家族史、临床症状、潜在疾病和生活方式疾病等。潜在疾病因素包括动脉硬化、自身免疫疾病、脑膜炎、冯雷克林豪森氏病、脑肿瘤、唐氏综合征、颅脑外伤、放疗和甲状腺功能亢进等。研究表明，动脉硬化与RNF213 c.14576G＞突变相关，所以排除在潜在疾病之外。使用genome试剂盒（Talent）从患者外周血中提取基因组DNA。通过小片段基因扩增法（small amplicon genotyping，SAG）进行高分辨溶解曲线分析（high-resolution melting curve analysis，HRM）筛选出RNF213 c.14576G＞A（外显子61），然后进行Sanger法测序。对c.14576G＞A的聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）引物设计为仅留一个碱基的侧翼突变。正向引物为5′-GCAAGTTGAATACAGCTCCATCA-3′，反向引物为5′-TGTGCTTGCTGAGGAAGCCT-3′。PCR条件是，变性温度95℃，持续2分钟；然后94℃持续30秒，进行45次循环；退火温度67℃，持续30秒。PCR后，使用96孔板LightScanner系统进行高分辨率熔解曲线分析（图1）。
图1. 用SAG法检测RNF213基因61外显子c.14576G＞A突变。A.归一化荧光图；B.两种基因型有明显的差异，灰色为野生型（wt，c.14576G/wt），红色为杂合型（wt/c.14576A）。
研究最终纳入86例患者（76例MMD与10例QMMD）。所有患者的平均发病年龄为35岁，MMD患者平均年龄34岁（1-77岁），QMMD患者平均年龄43.4岁（20-62岁）。女性61例（其中55例MMD和6例QMMD），男性25例（其中21例MMD和4例QMMD）。15.8% MMD患者（12/76）和10% QMMD患者（1/10）有家族史。发病时的临床症状显示，MMD组脑缺血48例，脑出血11例，头痛7例，无症状4例和其它类型6例；QMMD组脑缺血6例，脑出血0例，头痛2例，无症状1例和其它类型1例。两组患者在年龄、性别、家族史和发病时临床症状方面无显著差异。RNF213 c.14576G＞A基因突变在MMD组64例（84.2%）与QMMD组8例（80%）。两组患者突变频率差异无统计学意义（p=0.584）。基于RNF213 c.14576G＞A基因突变的亚组分析显示，两组患者在年龄、性别、家族史和发病时症状方面无显著差异。QMMD组中，合并甲状腺功能亢进6例，神经纤维瘤病1型（neurofibromatosis type 1，NF1）2例，干燥综合征1例和脑膜炎1例。在5例甲状腺功能亢进、1例NF1、1例干燥综合征和1例脑膜炎患者中均发现RNF213 c.14576G＞A突变。RNF213基因突变与非RNF213基因突变患者在年龄、性别、发病方式、临床表现、家族史、动脉硬化危险因素（含吸烟、高血压、糖尿病、血脂异常和缺血性心脏病）方面无显著性差异。有家族史的烟雾病患者倾向于与基因突变相关（p=0.0928）。最后作者指出，QMMD有两种类型，一种血管异常与合并潜在疾病有关，另一种血管异常与合并潜在疾病无关。RNF213 c.14576G＞A多态性可能有助于QMMD合并潜在疾病的诊断，以及有助于制定部分QMMD患者的治疗策略。
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